Notícia

O Javascript está desabilitado no seu navegador.Alguns recursos deste site não funcionarão se o JavaScript estiver desabilitado.
Registre-se com seus detalhes específicos e o medicamento específico de seu interesse, e nós compararemos as informações que você fornecer com os artigos em nosso extenso banco de dados e enviaremos uma cópia em PDF por e-mail imediatamente.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, Departamento de Doenças Infecciosas, Primeiro Hospital Afiliado da Universidade de Suzhou, Cidade de Suzhou, Província de Jiangsu, 215000 Tel.tumores do aparelho digestivo com sobrevida global em 5 anos de 14,1%.Muitos pacientes com CHC são diagnosticados em estágio avançado, portanto, a triagem precoce é essencial para reduzir a mortalidade por CHC.Além dos indicadores de detecção comumente usados, como alfafetoproteína sérica (AFP), alfafetoproteína reativa à lectina do cristalino (AFP-L3) e protrombina anormal (proteína II induzida por deficiência de vitamina K, PIVKA-II), técnicas de biópsia de fluido Tem demonstrado ser de valor diagnóstico na detecção de CHC.Em comparação com procedimentos invasivos, a biópsia de fluido pode detectar metabólitos malignos circulantes.As técnicas de biópsia de fluido detectam células tumorais circulantes, DNA tumoral circulante, RNA circulante e exossomos e são usadas para triagem precoce, diagnóstico e avaliação prognóstica do CHC.Este artigo revisa a biologia molecular e a aplicação de várias técnicas de biópsia de fluido para isolar biomarcadores promissores que podem ser opções viáveis ​​para avaliação precoce do CHC para melhorar a triagem precoce de grupos de CHC de alto risco.Palavras-chave: técnica de biópsia fluida, carcinoma hepatocelular, grupo de alto risco.
O carcinoma hepatocelular (CHC) é um tumor maligno comum do trato digestivo, ocupando o sexto lugar entre os novos casos de tumores malignos em homens e mulheres.1 Em todo o mundo, o câncer de fígado é a terceira principal causa de morte por câncer depois do câncer de pulmão e colorretal, sendo responsável por 8,3% das mortes relacionadas ao câncer de todas as neoplasias malignas.1 O prognóstico do CHC está intimamente relacionado ao estágio no momento do diagnóstico.Os principais motivos de baixa sobrevida no CHC são metástases intra-hepáticas, trombos de tumor venoso portal e metástases à distância impossibilitando a ressecção, e muitas dessas características já estão presentes nos pacientes no momento do diagnóstico.
Com base nas diretrizes de diagnóstico e tratamento, os principais fatores de risco para o desenvolvimento de CHC são cirrose hepática, infecção crônica pelo vírus da hepatite B (HBV) ou vírus da hepatite C (HCV), doença hepática gordurosa alcoólica e doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA). ).2 Além disso, os fatores de risco para CHC incluem ingestão de alimentos contaminados por aflatoxina, esquistossomose, outras causas de cirrose, história familiar de câncer de fígado, diabetes, obesidade, tabagismo e lesão hepática induzida por drogas.Grupos de alto risco de 35 e 45 anos devem fazer check-ups médicos regulares.A triagem precoce é uma importante estratégia de tratamento precoce para melhorar a sobrevida global de pacientes com CHC.
Biomarcadores como AFP, AFP-L3 e PIVKA-II são recomendados para rastreamento precoce do CHC3,4.As técnicas de biópsia líquida têm mostrado resultados promissores no diagnóstico precoce e na avaliação do tratamento.5,6 Progresso significativo foi feito na biópsia líquida de CHC, que pode ter maior sensibilidade e especificidade do que os marcadores séricos comumente usados, como a AFP (Tabela 1).
A AFP é um biomarcador amplamente utilizado no CHC e atualmente é o biomarcador mais detalhado amplamente utilizado para triagem precoce, diagnóstico e avaliação da doença.Um nível de AFP persistentemente elevado é considerado um fator de risco para a progressão do CHC.7,8 A taxa de detecção de carcinoma hepatocelular pequeno (sHCC) está aumentando com o desenvolvimento da ultrassonografia e da tomografia computadorizada, e a AFP tem se mostrado particularmente insensível à detecção de hHCC na prática clínica.De acordo com um estudo multicêntrico retrospectivo9, AFP positivo foi encontrado em 46% (616/1338) dos casos de CHC e 23,4% (150/641) dos casos de sHCC.Além disso, os níveis de AFP estão elevados em pacientes com doença hepática crônica e cirrose.10 Assim, a AFP tem um efeito de triagem limitado para sHCC.11 De acordo com as Diretrizes de Prática Clínica da Ásia-Pacífico para Carcinoma Hepatocelular, o uso de AFP não é recomendado.12 Evidências clínicas sugerem que PIVKA-II é superior à AFP no tratamento de CHC e que a combinação de PIVKA-II e AFP tem maior valor diagnóstico no CHC.13 Em comparação com a biópsia de tecido, a biópsia de fluido detecta principalmente metabólitos associados ao tumor em fluidos corporais (sangue, saliva, líquido pleural, líquido cefalorraquidiano ou urina) e é menos invasiva aos tecidos.14 Além disso, biópsias líquidas podem refletir características malignas não presentes no tecido tumoral primário.15 As biópsias líquidas ainda não estão sendo testadas na prática clínica para todos os tipos de tumores, mas seu potencial diagnóstico no câncer está chamando a atenção dos oncologistas.16 A biópsia de fluido pode detectar células tumorais circulantes (CTCs), DNA tumoral circulante (cDNA), RNA livre circulante (ecRNA) e exossomos.Neste artigo, discutiremos as características, o papel e a aplicação de várias técnicas de biópsia de fluido na triagem precoce de grupos de CHC de alto risco.
O DNA extracelular (cfDNA) em amostras de sangue de indivíduos saudáveis ​​foi descrito pela primeira vez em 1948 por Mandel et al.17 cfDNA é um fragmento de DNA livre de células com aproximadamente 160-180 pb de comprimento, originado principalmente de linfócitos e células mieloides.O ctDNA é um fragmento de DNA mutante específico liberado pelas células tumorais no sangue periférico, que representa a informação genômica das células tumorais após certos processos fisiopatológicos, incluindo necrose, apoptose e excreção.A proporção de ctDNA no cfDNA total varia amplamente com o tipo de tumor, e os fragmentos de cDNA são relatados como tendo tipicamente menos de 167 pb de comprimento.18 O estudo de Underhill mostrou que os fragmentos de cfDNA são geralmente mais curtos do que o cfDNA normal.19 Em comparação com indivíduos saudáveis, o comprimento total dos fragmentos de cfDNA no sangue de pacientes com câncer é menor, então o cfDNA pode ser usado como um indicador de rastreamento tumoral precoce.O enriquecimento de certos subconjuntos de comprimentos de fragmentos de cfDNA pode melhorar a detecção de cDNA associado a tumores sólidos não metastáticos.Estudos mostraram que o ctDNA é encontrado em mais de 75% dos cânceres avançados de pâncreas, cólon, bexiga, gastrointestinal, fígado, ovário, mama, melanoma e cabeça e pescoço.20,21 No entanto, a quantidade de ctDNA no sangue depende da localização do tumor.22 Em um estudo de Bettegoud, pacientes com câncer colorretal, mama, fígado, pulmão e próstata apresentaram níveis mais altos de cDNA no sangue do que outros cânceres.Em contraste, em pacientes com câncer oral, câncer pancreático, câncer gástrico e glioma, a concentração de cDNA no sangue foi menor.vinte e um
Como o ctDNA contém as mesmas mutações genéticas que as células tumorais primárias, o cDNA pode ser usado para detectar mutações heterogêneas específicas do tumor e alterações epigenéticas, incluindo metilação, hidroximetilação, variações de nucleotídeo único e variações do número de cópias.vinte e três
A metilação do DNA é uma das alterações epigenéticas mais comuns, resultando em repressão gênica.Em comparação com células normais, existem diferenças no nível geral de metilação do genoma da célula tumoral, especialmente na metilação de genes supressores de tumor, que podem ser detectados em um estágio inicial, sugerindo que alterações na metilação do DNA podem ser um indicador de detecção de tumorigênese.Os genes supressores de tumor associados ao HCC podem ser inativados pela metilação do promotor, estimulando assim a tumorigênese.24 A metilação do DNA é um marcador ideal para o diagnóstico precoce de tumores devido à sua especificidade tecidual, detectabilidade e independência de idade.Além disso, a metilação do DNA é mais comum em comparação com as mutações somáticas porque existem mais regiões alvo e vários sítios CpG alterados em cada região do genoma alvo.25 Além de vários sítios CpG, um grande número de loci hipermetilados independentes no ctDNA foi identificado em DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 e RGS10.26 Xu et al.A comparação de amostras de cfDNA de 1.098 pacientes com HCC e 835 controles saudáveis, onde os genes associados ao HCC se correlacionaram fortemente com as assinaturas de metilação de cDNA no plasma correspondentes.25 Com base em análise laboratorial, foi desenvolvido um modelo preditivo contendo 10 marcadores de metilação com sensibilidade e especificidade de 85,7% e 94,3%, respectivamente, e esses marcadores foram altamente correlacionados com massa tumoral, estágio tumoral e resposta ao tratamento.Esses resultados indicam que o uso de marcadores de metilação de cDNA é uma grande promessa no diagnóstico, monitoramento e prognóstico do CHC.Em um modelo de metilação composto por três genes metilados aberrantemente (APC, COX2, RASSF1A) e um miRNA (miR203) apresentado por Lu e cols.27, a sensibilidade e especificidade do modelo 27 para o diagnóstico de HCC associado ao HBV foram comparáveis.80%.Além disso, o modelo pode detectar 75% dos pacientes com CHC não diagnosticados com um nível de AFP de 20 ng/mL.O gene para a proteína da família 1A do domínio associado a Ras (RASSF1A) é a principal sequência de DNA repetitiva no genoma humano.Araújo et ai.concluíram que a hipermetilação do promotor RASSF1A pode ser um biomarcador valioso para triagem precoce de HCC e um potencial alvo molecular para terapia epigenética.28 Em um estudo, a hipermetilação sérica do promotor RASSF1A foi encontrada em 73,3% dos pacientes com CHC.29 Long interspersed nucleotide element 1 (LINE-1) é outro mediador de retrotransposição altamente ativo.A hipometilação do LINE-1 foi encontrada no DNA de 66,7% das amostras de soro de CHC e foi associada à recorrência precoce e baixa sobrevida após ressecção radical.29 A hipermetilação é um processo genético comum que desempenha um papel único no desenvolvimento da cirrose hepática e do CHC.30 Em contraste, a hidroximetilação é um processo de desmetilação que induz a reativação e expressão de genes, e a detecção do produto 5-hidroximetilcitosina (5-hmC) nesse processo pode ser usada para identificar um tumor.A metilação e a hidroximetilação do cDNA estão associadas à tumorigênese e podem contribuir para o rastreamento precoce do CHC.Em um estudo de 2.554 indivíduos, 31 5-hmCs de todo o genoma foram encontrados em amostras de cfDNA e 32 genes foram identificados comparando sequências de 5-hmC em pacientes com CHC e grupos de alto risco, como aqueles com doenças crônicas.Modelos diagnósticos de doenças hepáticas.e cirrose.Este modelo foi superior ao AFP na distinção de HCC de tecido não tumoral.
Mutações nas regiões de codificação podem levar a anormalidades transcricionais, que podem levar a alterações nas sequências de proteínas e, finalmente, ao câncer.As variantes de nucleotídeo único são marcadores genômicos importantes para a triagem precoce de tumores devido à sua alta confiabilidade do tecido e alta especificidade do tumor e do tecido.Numerosos estudos relacionados ao HCC usando sequenciamento de próxima geração (NGS) para o sequenciamento de exoma e genoma completo de câncer identificaram genes celulares mutados comuns, como TP53 e CTNNB1, bem como vários, incluindo ARID1A, MLL, IRF2.Os novos genes, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 e JAK1 apresentam taxas de mutação moderadas. A análise da função do gene mutante sugere que alterações na remodelação da cromatina, transdução de sinal Wnt/β-catenina e JAK/STAT, a via do ciclo celular P53, modificadores epigenéticos, vias de estresse oxidativo, a via PI3K/AKT/MTOR e a via RAS/RAF/ A via da MAPK quinase desempenha papéis cruciais na oncogênese do CHC.32,33 Em um estudo no qual foram detectadas mutações associadas ao tumor, Huang et al descobriram que a frequência de mutações associadas ao tumor dependentes do ctDNA foi de 19,5% e a especificidade foi de 90%. .34 Além disso, os pacientes que sofreram invasão vascular eram mais propensos a ter mutações no ctDNA (P=0,041) e menor sobrevida livre de recorrência (P<0,001). A análise da função do gene mutante sugere que alterações na remodelação da cromatina, transdução de sinal Wnt/β-catenina e JAK/STAT, a via do ciclo celular P53, modificadores epigenéticos, vias de estresse oxidativo, a via PI3K/AKT/MTOR e a via RAS/RAF/ A via da MAPK quinase desempenha papéis cruciais na oncogênese do CHC.32,33 Em um estudo no qual foram detectadas mutações associadas ao tumor, Huang et al descobriram que a frequência de mutações associadas ao tumor dependentes do ctDNA foi de 19,5% e a especificidade foi de 90%. .34 Além disso, os pacientes que sofreram invasão vascular eram mais propensos a ter mutações no ctDNA (P=0,041) e menor sobrevida livre de recorrência (P<0,001).A análise da função do gene mutante sugere que alterações na remodelação da cromatina, sinalização Wnt/β-catenina e JAK/STAT, via do ciclo celular P53, modificadores epigenéticos, vias de estresse oxidativo, via PI3K/AKT/MTOR e via quinase RAS/RAF/MAPK desempenham um papel crítico na tumorigênese do CHC.32,33 Em um estudo que encontrou mutações associadas ao tumor, Huang et al.descobriram que a frequência de mutações associadas a tumores dependentes de ctDNA foi de 19,5% e a especificidade foi de 90%..34 Кроме того, у пациентов с сосудистой инвазией чаще встречались мутации цДНК (P=0,041) и более короткая безрецидивная выживаемость (P<0,001). .34 Além disso, pacientes com invasão vascular apresentaram mais mutações de cDNA (P=0,041) e menor sobrevida livre de doença (P<0,001).A análise funcional dos genes mutantes revelou remodelação da cromatina, sinalização Wnt/β-catenina e JAK/STAT, via do ciclo celular P53, modificadores epigenéticos, via do estresse oxidativo, via PI3K/AKT/MTOR e RAS/RAF/MAPK A via da quinase desempenha um papel crítico na oncogênese do CHC. 32,33 在一项检测到肿瘤相关突变的研究中，Huang 等人发现肿瘤相关突变依赖于ctDNA 的频率为19.5%，特异性为90% .34 此外，经历血管侵犯的患者更有可能发生ctDNA突变（P=0,041）和更短的无复发生存期（P<0,001）。 32.33 在 一 检测 到 相关 突变 的 ， ， Huang 等 肿瘤 相关 突变 依赖于 ctDNA 的 为 为 19,5% ， 特异性 为 90% .34 此外 经历 血管 的 更 可能 发生 ctdna 突变 突变 此外 此外） 侵犯 的 更 可能 发生 发生 ctdna 突变 （此外 0,04））） 的 更 可能 发生 发生 ctdna 突变 （（0,041短的无复发生存期（P<0,001）。32,33 Em um estudo que encontrou mutações associadas ao tumor, Huang et al.verificaram que as mutações associadas ao tumor eram 19,5% dependentes do cDNA com especificidade de 90% 34. Além disso, os pacientes que sofreram invasão vascular eram mais propensos a desenvolver cDNA.мутация (P = 0,041) e более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). mutação (P=0,041) e menor sobrevida livre de doença (P<0,001).Outro gene condutor de HCC comum é o TP53, que tem uma taxa de mutação superior a 30%.Estudos mostraram que a frequência de mutações TP53 no ctDNA no sangue e na urina varia de 5% a 60%.35 O estudo de Johan mostrou que o espectro de mutação do ctDNA no HCC tardio tem uma taxa de mutação semelhante ao HCC inicial, incluindo o promotor TERT (51%), TP53 (32%), CTNNB1 (17%), PTEN (8%), mutações em AXIN1., ARID2, KMT2D e TSC2 (6% cada).36 O oncogene β-catenina (CTNNB1) desempenha um papel importante na via de sinalização Wnt.O coativador de transcrição CTNNB1 pode promover a expressão gênica, o que pode levar à proliferação celular, inibição da apoptose e angiogênese.CTNNB1 também pode interagir com TERT para induzir a transformação de hepatócitos.33 O promotor TERT é frequentemente mutado em alguns tumores sólidos.Alterações no TERT, uma das primeiras alterações genéticas na transformação maligna do CHC, podem levar à reativação da telomerase em hepatócitos cirróticos e podem promover a proliferação e prevenir o envelhecimento.Mutações no promotor 33-37 TERT foram relatadas em 59-90% dos pacientes com nódulos hepáticos proliferativos e CHC precoce e estão associadas à sobrevida.38
As alterações no número de cópias (CNA) são um subtipo importante de mutações somáticas.A pesquisa mostrou que a carga generalizada e focal do CNA é uma assinatura genômica capaz de prever a infiltração e exclusão imune do tumor em alguns tipos de câncer.39 Sinalização de infiltração ativa, alta atividade citolítica, inflamação grave e marcadores genéticos associados à apresentação de antígenos no CHC.A análise da matriz de dados de polimorfismos de nucleotídeo único em 477 indivíduos revelou uma baixa carga no SNC.Em contraste, tumores cromossomicamente instáveis ​​com uma carga extensa de CNA alta mostraram sinais de rejeição imune e foram associados com proliferação, reparo de DNA e disfunção de TP53.Xu et ai.mostraram que o grupo CHC apresentou escores CNA mais elevados do que o grupo com doença hepática crônica.40 Usando o sequenciamento de todo o genoma de uma única célula, os CNAs aparecem no início da hepatocarcinogênese e permanecem relativamente estáveis ​​durante a progressão do tumor.41 Chung et al.descobriram que os níveis de cfDNA estavam significativamente elevados em pacientes com CHC e que os CNAs de todo o genoma no cfDNA eram um importante marcador prognóstico independente em pacientes com CHC tratados com sorafenibe.42 Pacientes com maior carga de CNA eram mais propensos a progressão da doença e morte do que aqueles com menor carga de CNA.Ollerich et ai.descobriram que o índice de instabilidade do número de cópias (CNI) pode ser usado para avaliar CNA no cfDNA de pacientes com câncer.Eles observaram que os pacientes com câncer avançado tiveram pontuações CNI significativamente mais altas do que um grupo controle, que avalia a resposta do paciente à quimioterapia sistêmica e imunoterapia.43 Esses resultados sugerem que os CNAs encontrados em espécimes de biópsia líquida podem servir como indicadores prognósticos em pacientes com câncer avançado.HCC no contexto da terapia sistêmica.
Atualmente, os métodos usados ​​para detectar ctDNA podem ser divididos em métodos direcionados e não direcionados.Resumidamente, métodos direcionados, como reação em cadeia da polimerase digital (dPCR), PCR digital BEAMing, Amplification Refractory Mutation System-PCR, Capp-Seq e Tam-Seq são altamente sensíveis a genes predefinidos.Métodos fora do alvo, como sequenciamento de genoma completo e NGS, fornecem uma visão abrangente de todo o cenário genômico.44 Em comparação com os painéis-alvo, o sequenciamento completo do genoma pode detectar não apenas mutações pontuais e inserções, mas também rearranjos e variações no número de cópias.prognóstico, e CTC e cfDNA são bons indicadores que podem ser usados ​​para monitoramento dinâmico do CHC.45 Além disso, a análise de cfDNA pode ser mais útil na detecção de CHC.Yan et ai.mostraram que o cfDNA no plasma de pacientes com CHC foi significativamente maior do que em pacientes com fibrose hepática e controles saudáveis.Em comparação com a AFP, espera-se que o ctDNA seja um melhor marcador de triagem para CHC precoce.46 Em um estudo prospectivo de 47 biópsias líquidas que testaram cfDNA e proteína em uma população populacional, elas se mostraram eficazes na diferenciação de pacientes com CHC de pacientes sem CHC.Em um acompanhamento de 331 pacientes com ultrassonografia normal e AFP-negativos, a sensibilidade e especificidade do cfDNA para o diagnóstico de CHC foram de 100% e 94%, respectivamente, de modo que o cDNA pôde detectar CHC em indivíduos soropositivos para HBsAg assintomáticos.No estudo Yeo48, uma alta frequência (92,5%) de hipermetilação do promotor RASSF1A foi encontrada em pacientes com CHC.Além disso, Xu et al.criaram um modelo diagnóstico para prever CHC usando um painel de marcadores de metilação específicos com especificidade e sensibilidade de 90,5% e 83,3%, respectivamente.O painel permite distinguir pacientes com CHC de pacientes com outras doenças hepáticas, o que é melhor do que AFP.Eles também descobriram que controles normais que testaram positivo podem ter fatores de risco para HCC, como infecção por HBV ou histórico de uso de álcool.25 Nossa hipótese é que fatores de alto risco para CHC podem promover hipermetilação do cfDNA, que então contribui para a progressão do CHC e, portanto, o cfDNA pode desempenhar um papel fundamental na triagem de grupos de alto risco.Cai et ai.resumir toda a gama de mutações de ctDNA e oferecer uma estratégia robusta para avaliar a carga tumoral em pacientes.49 Essa estratégia pode identificar a tumorigênese em mediana de 4,6 meses antes da mudança de imagem e mostrou desempenho diagnóstico superior em comparação com os biomarcadores séricos AFP, AFP-L3 e PIVKA-II.O valor diagnóstico do teste de cDNA foi demonstrado quando a avaliação de imagem não está disponível, portanto, o teste de cDNA é valioso no diagnóstico de CHC precoce em grupos de alto risco.Recentemente, os cientistas usaram a tecnologia NGS para analisar indicadores de variação genética multivariada (incluindo 5-hidroximetilcitosina, 5'-motivo, fragmentação, traço de nucleossomo, HIFI) em 3.204 amostras clínicas e cfDNA.50 Modelos HIFI revalidados com três conjuntos de treino, teste e teste independentes mostraram discriminação estável e confiável entre populações HCC e não HCC com sensibilidade de 95,79% e 95,42% em testes específicos de HCC e conjuntos de testes, respectivamente.Os sexos foram 95,00% e 97,83%, respectivamente.O valor diagnóstico do método HIFI é maior que o da AFP na distinção entre CHC e cirrose.Além disso, o ctDNA também é usado no tratamento cirúrgico.Atsushi et ai.determinaram os níveis séricos pré-operatórios de ctDNA em pacientes com CHC e descobriram que a taxa de recorrência e a taxa de metástase extra-hepática no grupo cDNA positivo foram significativamente maiores do que no grupo cDNA negativo, e os níveis de cDNA foram significativamente correlacionados.com progressão tumoral.51 Sendo um biomarcador altamente sensível, o ctDNA pode prever a capacidade do CHC de invadir vasos.Wang et ai.realizaram o sequenciamento do genoma completo de 46 pacientes com CHC, e a análise multivariada mostrou que o valor limite da frequência alélica da variante de cDNA para invasão em microvasos é de 0,83%, sensibilidade de 89,7% e especificidade de 80,0%.um fator de risco independente para invasão microvascular no CHC ressecável, sugerindo que o cDNA pode ajudar a orientar o tratamento ideal.Em conclusão, o ctDNA está totalmente implicado na ocorrência e desenvolvimento do CHC e pode ser usado para triagem precoce, avaliação cirúrgica e monitoramento da doença.
CTCs são células malignas derivadas de tumores primários ou metástases que metastatizam para a corrente sanguínea.As células tumorais secretam metaloproteinases de matriz (MMPs), que quebram a membrana basal, permitindo que as células tumorais entrem diretamente no sangue e nos vasos linfáticos.No entanto, a maioria dos CTCs é rapidamente eliminada por anoikis, ataque imunológico ou estresse de cisalhamento.53 A transição epitelial-mesenquimal (EMT) permite que as CTCs sejam prontamente isoladas do tecido tumoral primário, invadam capilares e adquiram sobrevida, metástase, invasividade e resistência a drogas significativamente melhoradas.Estudos têm demonstrado que existe uma profunda heterogeneidade entre as várias células tumorais em tumores metastáticos primários.Assim, a análise CTC pode levar a uma compreensão abrangente da heterogeneidade das células tumorais.54
Marcadores específicos para CTCs associados a HCC incluem glipicano-3 (GPC3), receptor de asialoglicoproteína (ASGPR), molécula de adesão de células epiteliais (EpCAM) e marcadores associados a células-tronco, como CD44, CD90, 55 e molécula de adesão intercelular 1 (ICAM1).) .56 O marcador GPC3 é uma proteína ancorada na membrana celular que é usada clinicamente para análise patológica e caracterização do CHC.57 A expressão de GPC3 é mais comum em células tumorais HCC com diferenciação intermediária e baixa e promove migração extra-hepática;além disso, a presença de CTCs GPC3+ indica HCC metastático.58 ASGPR é uma proteína transmembrana expressa apenas na superfície dos hepatócitos e é altamente expressa em CHC bem diferenciado.EpCAM é uma das proteínas associadas à membrana mais comumente usadas para capturar CTCs.O EpCAM foi identificado como um marcador de superfície de células HCC com características de células-tronco,59 que se correlaciona com várias características clínico-patológicas do HCC, como invasão vascular, níveis avaliados de AFP e estágio avançado de câncer de fígado no Hospital de Barcelona (BCLC).O fenótipo 60 CTC EMT é altamente metastático.54 Os processos de EMT no CTC promovem a metástase do HCC.A expressão de marcadores EMT, como vimentina, twist, E-box zinc finger binding (ZEB) 1, ZEB2, snail, slug e E-caderina, foi estudada em CTCs derivadas do fígado de pacientes com CHC.58 O sistema CanPatrol™ desenvolvido por Cheng [61] classificou as CTCs em três subgrupos fenotípicos com base em marcadores predominantemente expressos: fenótipo epitelial (EpCAM, CK8/18/19), fenótipo mesenquimal (vimentina, enrolado) e fenótipos mistos.Em 176 pacientes, a CTC total foi superior à AFP na diferenciação de HCC de doença hepática benigna.Os valores de AUC para CTC total, AFP e CTC total combinado e AFP foram 0,774 (IC de 95%, 0,704-0,834), 0,669 (IC de 95%, 0,587-0,750) e 0,821 (IC de 95%, 0,756-0,886). ).), respectivamente.A classificação CTC baseada em EMT pode prever o diagnóstico de CHC, recorrência precoce, metástase e tempo total mais curto.
Atualmente, os métodos para detectar CSCs incluem métodos físicos e métodos biológicos.Os métodos físicos, muitas vezes referidos como enriquecimento baseado em propriedades biofísicas, dependem principalmente das propriedades físicas do CSC, como tamanho, densidade, carga, mobilidade e deformabilidade.Dependendo das propriedades físicas, existem vários métodos, como sistemas baseados em filtração, dieletroforese, etc. Este último, também conhecido como enriquecimento baseado em imunoafinidade, baseia-se principalmente na ligação antígeno-anticorpo, pois o método utiliza anticorpos contra biomarcadores específicos do tumor como EpCAM, ASGPR, receptor 2 do fator de crescimento epidérmico humano (HER2), antígeno prostático específico (PSA), pancitoqueratina humana (P-CK) e carbamoil fosfato sintase 1 (CPS1).62 Outro tipo, chamado de método sem enriquecimento, usa citometria de fluxo para diferenciar CTCs de leucócitos com base em uma maior proporção e tamanho núcleo-citoplasma.Atualmente, o único teste aprovado pela FDA para a detecção de CTCs é o sistema Cell-Search™, que usa o marcador de superfície celular EpCAM. No entanto, a detecção de CTC baseada em marcadores combinados pode aumentar a taxa de positividade.54 Uma mistura de anticorpos contra ASGPR e CPS1 atingiu uma taxa de detecção de CTC de 91% em pacientes com CHC.63 Zhang et al usaram um CTC-Chip com anticorpos contra ASGPR, P -CK e CPS1, e diferenciaram pacientes com CHC daqueles com doença hepática benigna ou câncer não HCC a uma taxa de 100%.64 Um estudo de Wang detectou CTCs EpCAM+ em 60% de 42 pacientes com CHC e encontrou correlações significativas entre ambas a positividade e o número de CTCs com estágio TNM.65 Guo et al descobriram que um escore de PCR derivado de CTC foi elevado em 125/171 (73%) pacientes cujo nível de AFP era <20 ng/mL com uma sensibilidade de 72,5% e um especificidade de 95,0%, em comparação com 57,0% e 90,0% para AFP no ponto de corte de 20 ng/mL.66 A combinação de AFP e CTCs pode melhorar a detecção de CHC.45 Acredita-se que os CTCs tenham uma vantagem sobre a AFP na triagem precoce de grupos de alto risco para CHC. No entanto, a detecção de CTC baseada em marcadores combinados pode aumentar a taxa de positividade.54 Uma mistura de anticorpos contra ASGPR e CPS1 atingiu uma taxa de detecção de CTC de 91% em pacientes com CHC.63 Zhang et al usaram um CTC-Chip com anticorpos contra ASGPR, P -CK e CPS1, e diferenciaram pacientes com CHC daqueles com doença hepática benigna ou câncer não HCC a uma taxa de 100%.64 Um estudo de Wang detectou CTCs EpCAM+ em 60% de 42 pacientes com CHC e encontrou correlações significativas entre ambas a positividade e o número de CTCs com estágio TNM.65 Guo et al descobriram que um escore de PCR derivado de CTC foi elevado em 125/171 (73%) pacientes cujo nível de AFP era <20 ng/mL com uma sensibilidade de 72,5% e um especificidade de 95,0%, em comparação com 57,0% e 90,0% para AFP no ponto de corte de 20 ng/mL.66 A combinação de AFP e CTCs pode melhorar a detecção de CHC.45 Acredita-se que os CTCs tenham uma vantagem sobre a AFP na triagem precoce de grupos de alto risco para CHC.No entanto, a detecção combinada de CTCs baseada em marcadores pode aumentar a porcentagem de resultados positivos.54 Uma mistura de anticorpos anti-ASGPR e CPS1 atingiu uma taxa de detecção de CTC de 91% em pacientes com CHC.63 Zhang et al.usaram um CTC-Chip com anticorpos contra ASGPR, P-CK e CPS1, e também distinguiram pacientes com HCC daqueles com doença hepática benigna ou não HCC a uma taxa de 100%.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге групп. frequência e número de CTCs com estágio TNM.65 Guo et al descobriram que a PCR derivada de CTCs estava elevada em 125/171 (73%) pacientes que tinham níveis de AFP <20 ng/mL com sensibilidade de 72,5% e especificidade de 95,0% em comparação com 57,0% e 90,0% para AFP em um nível de corte de 20 ng/mL.66 A combinação de AFP e CTCs pode melhorar a detecção de CHC.45 Considera-se que os CTCs têm uma vantagem sobre a AFP na triagem precoce grupos.com alto risco de CHC.No entanto, a detecção combinada de CTCs baseada em marcadores pode aumentar a porcentagem de resultados positivos.54 Uma mistura de anticorpos anti-ASGPR e CPS1 alcançou uma taxa de detecção de CTC de 91% em pacientes com CHC.63 Zhang et al.usaram chips CTC com anticorpos contra ASGPR, P-CK e CPS1 e distinguiram pacientes com HCC de hepatopatias benignas e não HCC com 100%.64 O estudo de Wang identificou 60% de CTCs EpCAM+ em 42 pacientes com CHC e encontrou uma correlação significativa entre incidência e número de CTCs no estágio TNM. 65 GUO 等 发现 ， 在 AFP 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 中 ， ctc 衍生 pcr 评分 升高 ， 敏感性 为 72,5%， 特异性 为 95,0%， 而 Afp 在 截止值为20 ng/mL 时的特异性为57,0% 和90,0%。 65 guo 等 人 发现 在 在 在 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 ， ， ， ctc 衍生 pCr 评分 ， 敏感性 为 为 72,5%， 为 95,0%， Afp 在 截止 截止 截止 截止 截止 ， ， ， 为 为 95,0%， Afp 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止 ，截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值 为 20ng/ml 时 特异性 为 为 57,0% 和 90,0%。65 Guo et al.обнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП на уровне отсечки Специфичность составляла 20 нг/мл. descobriram que em 125/171 (73%) pacientes com níveis de AFP <20 ng/mL, os valores de PCR derivados de CTC estavam elevados com sensibilidade de 72,5% e especificidade de 95,0%, enquanto a AFP estava na especificidade de corte foi de 20 ng/ml.ml foi de 57,0% e 90,0%.66 A combinação de ORP e CTC melhora a detecção de CHC.45 Acredita-se que as CTCs sejam superiores à AFP na triagem precoce de populações de CHC de alto risco.Assim, para grupos CTC-positivos e CHC de alto risco, o teste CTC deve ser rotineiramente combinado com ultra-som e detecção de AFP.No entanto, os CTCs são considerados importantes preditores de metástase e recorrência tumoral, e a detecção de CTCs não é recomendada independentemente como ferramenta diagnóstica.62 Portanto, o CTC pode servir como um biomarcador preditivo melhor do que outros marcadores usados ​​atualmente. Zhou et al descobriram que pacientes com números elevados de CTCs EpCAM+ e células T reguladoras apresentaram maior risco de desenvolver recorrência de CHC, do que aqueles com baixo número de CTCs, com uma taxa de recorrência de 66,7% vs 10,3% (P <0,001).67 Um estudo semelhante foi relatado por Zhong et al.68 Além disso, Qi descobriu que 101 de 112 pacientes (90,81%) com CHC, incluindo aqueles com doença em estágio inicial, foram positivos para CTCs e que nódulos muito pequenos de CHC foram detectados após 3 a 5 meses de seguimento. Zhou et al descobriram que pacientes com números elevados de CTCs EpCAM+ e células T reguladoras apresentaram maior risco de desenvolver recorrência de CHC do que aqueles com baixo número de CTCs, com uma taxa de recorrência de 66,7% vs 10,3% (P < 0,001).67 A estudo semelhante foi relatado por Zhong et al.68 Além disso, Qi descobriu que 101 de 112 pacientes (90,81%) com CHC, incluindo aqueles com doença em estágio inicial, foram positivos para CTCs e que nódulos muito pequenos de CHC foram detectados após 3 a 5 meses de acompanhamento. Чжоу и др.обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Zhou et al verificaram que pacientes com CTCs EpCAM+ elevados e células T reguladoras tinham maior risco de recorrência de CHC do que aqueles com CTCs baixos, com uma taxa de recorrência de 66,7% vs 10,3% (P<0,001)67.Um estudo semelhante foi realizado por Zhong et al.68. Além disso, Qi descobriu que 101 de 112 pacientes (90,81%) com CHC, incluindo aqueles com doença inicial, tinham CTCs, e que nódulos de CHC muito pequenos foram detectados após 3 a 5 meses de acompanhamento. Zhou 等 发现 ， 与 ctc 数量 少 的 患者 ， epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 升高 的 发生 hcc 复发 的 风险 更 高 ， 复发率 为 为 66,7% 和 10,3% (p <0,001) Zhou 等 人 发现 与 与 ctc 数量 少 的 患者 相比 ， epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 发生 hcc 复发 风险 更 ， 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 10.3% ( p <0,001)。。。。。。。。。。。。。。。 Чжоу и др.обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). Zhou et ai.descobriram que pacientes com CTCs EpCAM+ e células T reguladoras elevadas apresentaram maior risco de recorrência de CHC em comparação com pacientes com menos CTCs, com taxas de recorrência de 66,7% e 10,3%, respectivamente (P < 0,001).Um estudo semelhante foi relatado por Zhong et al.68 Além disso, Qi descobriu que 101 de 112 pacientes com CHC (90,81%), incluindo pacientes com doença inicial, tiveram resultados positivos de CTC e encontraram nódulos de CHC muito pequenos após 3 visitas.Observação até 5 meses.Eles também encontraram CTCs em 12 pacientes com infecção crônica por HBV e encontraram pequenos tumores HCC dentro de 5 meses em 2 pacientes CTC-positivos.69 Assim, os CTCs podem ser usados ​​para prever CHC, 70 mas podem ser usados ​​mais rotineiramente como biomarcadores preditivos.
Assim como o cfDNA, o cfRNA é liberado na corrente sanguínea por meio de vários sistemas.Essas moléculas no sangue periférico representam o tecido canceroso de origem.Em comparação com marcadores detectados por métodos não invasivos, os cfRNAs são mais regulados dinamicamente, tecidos específicos e abundantes no ambiente extracelular.A significância e o valor diagnóstico de 71 miRNAs (miRNAs) no CHC foram relatados em muitos estudos.Os miRNAs são RNAs não codificantes endógenos (ncRNAs) que regulam várias atividades biológicas moleculares inibindo a tradução de RNAs mensageiros alvo (mRNAs).Os miRNAs estão localizados em corpos apoptóticos encapsulados em exossomos, mas também podem se ligar de forma estável a proteínas e lipídios séricos no sangue periférico e podem ser usados ​​para avaliar o CHC.Os microRNAs estão envolvidos na regeneração hepática, metabolismo lipídico, apoptose, inflamação e desenvolvimento de CHC.72 MiRNAs oncogênicos como miR-21, miR-155 e miR-221 são bem conhecidos em HCC.Em particular, o miR-21 desempenha um papel fundamental na síntese de colágeno na matriz extracelular e na fibrose e promove a hepatocarcinogênese pela ativação de células-tronco hematopoiéticas.72,73 Os miRNAs supressores de tumor no HCC incluem miRNA-122, miRNA-29, a família Let-7 e a família miRNA-15.A família Let-7 consiste em muitos miRNAs supressores de tumor que têm como alvo a família RAS.A família miR-15 inclui miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 e miR-497, que possuem sequências complementares para certos mRNAs.Além disso, RNAs não codificantes longos (lncRNAs) e RNAs circulares (cirRNAs) também são importantes para a triagem precoce do CHC.Os lncRNAs representam a classe mais ampla de ncRNAs, incluindo ncRNAs semelhantes a mRNAs, e estão envolvidos na patogênese de muitas doenças humanas.Os LncRNAs desempenham um papel regulador no microambiente hepático e na doença hepática crônica.74 CircRNAs também são uma classe de ncRNAs com múltiplas funções na regulação da expressão gênica.Recentemente, os circRNAs têm sido considerados como ferramentas diagnósticas para o CHC.
O RNA livre circulante tem uma estabilidade notável, incluindo resistência à temperatura, pH e RNase, o que torna o isolamento de fnRNA do sangue periférico menos tedioso usando métodos padrão de purificação de RNA.Os métodos mais comumente usados ​​incluem NGS, microarray e RT-qPCR.O NGS permite que os microRNAs sejam medidos em todo o genoma.No entanto, este método é caro e a análise não é padronizada.Em contraste, o RT-qPCR é barato, amplifica rapidamente os ácidos nucleicos e oferece muitas vantagens, como maior sensibilidade, maior precisão, faixa dinâmica mais ampla e requer menos amostras.Microarrays são outro método usado para detecção de miRNA baseado na hibridização sensível e específica de miRNAs alvo com sondas de DNA complementares, 75 mas a análise de dados de microarray é demorada.
Foi relatado que miR-122 e Let-7 circulantes são potencialmente úteis no diagnóstico de CHC em estágio inicial em grupos de alto risco, marcadores em pacientes com nódulos pré-malignos associados ao HBV e HCC em estágio inicial.76 Cai et al.descobriram que os membros da família Let-7 (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 e miR-199a/b) estão em risco de CHC em pacientes com hepatite.A família Let-7 pode servir como um biomarcador substituto eficaz para prever o desenvolvimento de CHC em grupos de alto risco associados à hepatite C crônica. 77 miR-122 tem alta precisão diagnóstica na detecção precoce de CHC em pacientes com cirrose hepática.78 O MiR-107 circulante sérico também foi avaliado nos estágios iniciais do CHC, 79 e mostrou bom potencial em populações de alto risco.Zhou et al relataram que um painel de miRNAs (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a e miR-801) pode diferenciar HCC de hepatite B crônica (CHB) e cirrose a sensibilidade foi de 79,1% e 75%, e a especificidade de 76,4% e 91,1%, respectivamente.80 No CHC relacionado ao HBV, descobrimos que os níveis de miR150 foram significativamente reduzidos em comparação com aqueles em pacientes crônicos do HBV sem CHC (sensibilidade 79,1%, especificidade 76,5%).-224 foi elevado no CHC em comparação com controles saudáveis, e as análises de subgrupo mostraram níveis mais elevados em pacientes com CHC associado ao HBV.pacientes com cirrose associada à hepatite B e HCC identificaram um classificador de siRNA contendo sete siRNAs diferencialmente expressos que podem detectar HCC em diferentes controles;O alcance da AUC na triagem precoce é melhor do que os voluntários da AFP.Eles descobriram que quatro miRNAs (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p e miR-365a-3p) poderiam distinguir pacientes com CHC de pacientes sem CHC.Cinco miRNAs superexpressando (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p e miR-148a-3p) são considerados potenciais infecções por HBV em HCC, cirrose e biomarcadores de CHB, especialmente miR-34a-5p podem ser biomarcadores para cirrose hepática,85 e podem ser biomarcadores potenciais para triagem precoce de CHC em populações de alto risco.O lncRNA mais estudado em HCC é altamente ativado em câncer de fígado (HULC).Outros estudos mostraram que o HULC circulante em pacientes com CHC pode ser usado como marcador diagnóstico, pois esse lncRNA é altamente suprarregulado em pacientes com CHC em comparação com indivíduos saudáveis.71,86 Entre outros lnRNAs, LINC00152 é considerado o melhor lncRNA diagnóstico devido à sua alta AUC, sensibilidade e especificidade.86 Em um estudo, a expressão sanguínea periférica de LINC00152 aumentou gradualmente de controles saudáveis ​​normais para pacientes com HBC e cirrose e, finalmente, foi mais alta em HCC.Estudos da expressão de circSMARCA5 no plasma de pacientes com CHC mostraram um declínio progressivo na expressão de CHC variando de hepatite a cirrose e lesões pré-cancerosas.87 A análise das curvas ROC confirmou o potencial desses circRNAs em distinguir pacientes com hepatite ou cirrose hepática daqueles com CHC, especialmente aqueles com níveis de AFP abaixo de 200 ng/mL.Além disso, Zhu analisou 13.617 RNAs cíclicos em amostras de plasma de pacientes com HCC associado ao HBV e confirmou que 6 RNAs cíclicos foram expressos de forma diferente no HCC e na cirrose associada ao HBV, sugerindo que os cRNAs podem ser benéficos.marcadores para triagem precoce de grupos de alto risco, como aqueles associados à doença hepática, pacientes com esclerose.88
Os exossomos são vesículas de membrana de 40 a 160 nm de diâmetro;múltiplas vesículas intracelulares se fundem com a membrana celular e são liberadas na matriz extracelular.Eles contêm muitos componentes ativos, incluindo lipídios, proteínas, RNA e DNA, e desempenham um papel fundamental na comunicação entre as células, tanto as células HCC quanto as não HCC.89,90 Os exossomos regulam a progressão do CHC pela ativação de fibroblastos de hepatócitos e células estreladas, células imunes, hepatócitos normais e células do CHC.91 No microambiente tumoral, as células tumorais produzem um grande número de exossomos que são transportados das células cancerígenas para as células imaturas, que por sua vez estão envolvidas na oncogênese, degradação e sinalização celular.92 Estudos mostraram que os exossomos podem transferir oncogenes para células normais durante processos patológicos, o que pode ser um dos mecanismos de invasão tumoral e metástase.93 O papel dos exossomos na progressão do câncer pode ser dinâmico e específico para o tipo de câncer, 89 Os exossomos podem ser internalizados por células adjacentes ou distantes para regular vários genes-alvo em células receptoras que podem estar envolvidos na comunicação intercelular de íons e interações celulares no microambiente, eles podem mediar a sinalização celular e o metabolismo.94 As características e alterações dinâmicas das moléculas de carga de exossomos refletem diretamente as características e alterações dinâmicas das células tumorais parentais,95 o que também é a base para o uso de exossomos no diagnóstico e prognóstico do câncer, bem como para prever a resposta individual à terapia anticâncer ..96
Os métodos laboratoriais tradicionais para isolar e analisar exossomos são complexos, de várias etapas e demorados, incluindo ultracentrifugação, filtração, cromatografia de exclusão por tamanho, purificação por imunoafinidade, Western blotting, ensaio imunossorvente ligado a enzima (ELISA), PCR e análise de fluxo.sistemas miniaturizados e plataformas lab-on-a-chip usando micro/nanotecnologia estão sendo amplamente desenvolvidos para o isolamento in situ rápido e conveniente de exossomos.A análise de rastreamento de nanopartículas (NTA) é um método amplamente utilizado para caracterizar o tamanho e a concentração de exossomos, incluindo métodos como nanopartículas magnéticas e polihidroxialcanoatos.Métodos microfluídicos e eletroquímicos também podem detectar rapidamente exossomos em altos rendimentos.
As proteínas exossomais são marcadores importantes para o diagnóstico do CHC.No estudo de Arbelaiz, o nível de proteína de ligação 98 RasGAP SH3 (G3BP) e receptor de imunoglobulina polimérica (PIGR) foi significativamente elevado em exossomos derivados de HCC, e a suposta eficácia combinada das duas proteínas foi superior à da AFP.A sobrecarga de ferro é um fator importante que contribui para o desenvolvimento do CHC.Tseng relatou que a hepcidina pode desempenhar um papel fundamental na resistência ao CHC.99 Exossomos derivados de soros de pacientes com CHC tinham um número de cópias significativamente maior de variantes de mRNA de hepcidina do que suas contrapartes saudáveis, sugerindo que a hepcidina pode ser um novo biomarcador diagnóstico para CHC.A proteína 14-3-3ζ em exossomos produzidos por 100 HCC pode reduzir a ativação, proliferação e diferenciação de células T e pode induzir a transformação de células T em células T reguladoras, resultando em depleção de células T.101 Isso é apoiado por vários estudos que investigam a evasão do tumor da vigilância imunológica, 102 o que pode contribuir para a tumorigênese do CHC.
Além da presença de ecRNA no plasma ou soro, exossomos enriquecidos com RNA podem ser usados ​​para estadiamento não invasivo em tempo real na triagem precoce de tumores e para determinar a evolução do tumor e a resposta à terapia.O nível de miRNA-21 exossomal no soro sanguíneo no grupo CHC foi 2,21 vezes maior do que no grupo CHB, e no grupo CHC foi 5,57 vezes maior do que na população saudável.No estudo de Wang, os exossomos aumentaram significativamente o CHC em comparação com pacientes cirróticos com valores de AUC de 0,83 (IC 95% 0,74–0,93) e 0,94 (IC 95% 0,88–1,00).104 Os dados obtidos elucidaram o envolvimento de moléculas específicas de carga exossomal na regulação da oncogênese e progressão do CHC.105 A expressão sérica de miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 e miR-26a é consistente.e metástase, e os níveis de miR21 foram muito mais altos em pacientes com CHC do que em controles saudáveis ​​e também em pacientes com CHB.102 LncRNA teve valor diagnóstico potencial em HCC.Estudos mostraram que exossomos derivados de soros de pacientes com CHC apresentam níveis significativamente mais elevados de LINC00161, LINC000635 e lncRNA ativados pelo fator de crescimento transformador-β do que em pacientes sem HCC, e esses lncRNAs estão fortemente associados ao estágio TNM e ao volume tumoral.110 Conigliaro et al.Os exossomos CD90+ expressam altos níveis de lncRNAH19, o que aumenta significativamente a liberação do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) e a produção do receptor VEGF-R1, estimulando assim a angiogênese.93 CircRNAs são outro tipo de ncRNAs exossomais – expressos em níveis mais baixos, mas estáveis ​​entre as espécies, os circRNAs também mostram especificidade para tipo de célula, tipo de tecido, estágio de desenvolvimento e atividade regulatória.111 circRNAs são biomarcadores diagnósticos para câncer precoce e minimamente invasivo.112 Ensaios clínicos recentes mostraram que a especificidade de miRNAs individuais na previsão de CHC não é ideal.Portanto, a detecção complexa usando vários ensaios (por exemplo, miR-122 e miR-48a em combinação com AFP) pode melhorar a identificação de CHC precoce e a diferenciação de CHC de cirrose.100
Pacientes com HCC e cirrose hepática são o grupo de alto risco mais comum para desenvolver CHC.Para grupos de alto risco, uma vez alcançada uma resposta virológica sustentada, deve ser desenvolvida uma estratégia de vigilância custo-efetiva baseada no risco de CHC, e a triagem precoce é a chave para melhorar o diagnóstico e o tratamento do CHC com uma alta relação custo-efetividade2 ..Os métodos de rastreamento precoce do câncer têm muitas limitações: métodos eficazes de rastreamento precoce não foram desenvolvidos para a maioria dos tipos de câncer e a adesão geralmente é baixa.Em comparação com os métodos tradicionais de triagem precoce, a tecnologia de biópsia líquida tem vantagens óbvias: facilidade de amostragem, detecção de panrac, boa reprodutibilidade da amostra e resposta eficaz à heterogeneidade do tumor.Dada a relação custo-benefício dos métodos associados à biópsia líquida, seu uso na triagem de CHC não foi testado rotineiramente.Apesar dos avanços na detecção precisa em nível molecular, a biópsia de fluido é cara para detectar CHC em pacientes-alvo, limitando seu uso generalizado em comparação com procedimentos de imagem específicos, como ultrassonografia e ressonância magnética.113,114 No entanto, um estudo anterior mostrou que a biópsia líquida mostrou um benefício significativo em termos de anos de vida ajustados pela qualidade (QALYs).115 Os benefícios da biópsia líquida no carcinoma inicial de estômago e nasofaringe também foram demonstrados.116,117 A visão atual é que a biópsia líquida pode complementar os biomarcadores séricos e a triagem radiológica na detecção e diagnóstico de tumores.117 118
De acordo com a literatura atual, a tecnologia de biópsia de fluido tem mostrado sensibilidade e especificidade significativamente maiores no rastreamento precoce de grupos de alto risco para câncer de fígado.Independentemente do tipo de biópsia de fluido, ela pode distinguir o CHC de indivíduos de alto risco sem CHC, sugerindo a importância do rastreamento precoce, pois as diferenças entre indivíduos de alto risco e saudáveis ​​são evidentes.O ctDNA tem uma meia-vida curta e pode ser usado para detectar HCC, portanto, quaisquer alterações no cDNA derivado do tumor podem fornecer evidências concretas em tempo real da progressão do tumor, especialmente para tumores pequenos.Um alto nível de ctDNA indica o desenvolvimento e disseminação do câncer e é um indicador precoce de progressão e recorrência.Além disso, com base nos resultados do ctDNA, os pacientes podem receber tratamento e acompanhamento individualizados.119 Sítios de metilação específicos podem ser um marcador melhor do que AFP para identificação precoce de HCC e nódulos cirróticos.Em casos ressecáveis ​​de CHC, níveis elevados de cDNA são indicativos de invasão microvascular e recorrência pós-operatória e metástase.Alterações no número de cópias estão associadas à sobrevida de pacientes com CHC.Pode-se supor que a avaliação do cDNA pode estar envolvida no tratamento geral do CHC, e o cDNA pode servir como um indicador eficaz de modulação terapêutica.Marcadores baseados em mutações genéticas específicas no ctDNA foram adotados por diretrizes clínicas para prever a eficácia e monitorar a resistência aos medicamentos.O teste de ctDNA pode ser a ferramenta de biópsia líquida mais útil para triagem precoce.Os CTCs também desempenham um papel fundamental na triagem precoce de grupos de CHC de alto risco.Vários marcadores de CTCs associados ao CHC são de particular importância no aparecimento, desenvolvimento e recorrência do CHC.Como vesículas de membrana, os exossomos estão envolvidos nas comunicações intercelulares, especialmente nas células HCC.Os microRNAs circulantes são estáveis ​​no sangue e, portanto, podem ser mais úteis para a triagem precoce do CHC.Gradualmente, proteínas exossomais e exossomos ricos em RNA foram descobertos, e sua eficácia preditiva para HCC foi confirmada.Curiosamente, diferentes etiologias de CHC também podem estar associadas a diferentes mutações, de modo que podemos selecionar diferentes biomarcadores para triagem precoce com base em diferentes etiologias de CHC.120
No entanto, as técnicas atuais de biópsia de fluidos são questionáveis ​​em termos de estabilidade e não podem realizar de forma independente a triagem ou monitoramento precoce do CHC, mas ainda podem complementar a triagem e o diagnóstico individual.121 Como forma de biópsia líquida, a detecção e imagem de ctDNA, CTC, cfRNA e AFP associada a exossomos ou PIVKA-II têm aplicações promissoras no diagnóstico precoce e prognóstico do CHC.No entanto, o mecanismo exato da liberação de ctDNA no sangue ainda precisa ser elucidado.Revelar as propriedades biológicas básicas do ctDNA pode facilitar seu uso como marcador.A pequena quantidade de ctDNA na circulação e os requisitos rigorosos de manuseio de amostras são desafios para a implementação clínica da detecção de cDNA no CHC.Além disso, as mutações genéticas não possuem características específicas que permitam a identificação precisa de carcinógenos.Uma vez que múltiplas variantes genéticas e somáticas também estão presentes em tecidos normais, mutações genéticas identificadas por biópsia de fluido podem ser de utilidade limitada na triagem precoce de CHC.122 As limitações de alvos gênicos úteis bem definidos e biomarcadores que ajudam a diferenciar cDNA de DNA não tumoral são as questões mais importantes no uso de cDNA.falta de utilidade de marcadores sensíveis e específicos para a detecção de CTCs.Apenas células viáveis ​​com potencial metastático foram encontradas, e a combinação ideal de marcadores enriquecidos com CSC não era clara.O isolamento de CTCs para cultura e avaliação de seus perfis mutacionais também é uma tarefa desafiadora.Devido a problemas com a identificação, isolamento e purificação de exossomos, o mecanismo molecular específico ainda não está claro, e estudos anteriores sobre o mecanismo de exossomos e HCC não foram aprofundados, e a forma como os miRNAs, lncRNAs e proteínas são classificados em exossomos , e não está claro se a absorção de exossomos é um processo de tipo específico.O uso de exossomos para o diagnóstico e tratamento do CHC ainda está em fase pré-clínica.A falta de padronização dos procedimentos de biópsia líquida, como o tipo de tubo usado para coletar sangue, volume sanguíneo, armazenamento e detecção de amostras, isolamento e enriquecimento, pode impedir seu uso na prática clínica de rotina devido às diferenças de práticas entre os centros médicos.A eficácia da biópsia líquida na triagem precoce, diagnóstico, avaliação de eficácia e predição de CHC ainda precisa ser explorada, especialmente para grupos de alto risco.A tecnologia de biópsia líquida tem grande potencial e espera-se que seja amplamente utilizada na prática clínica do câncer de fígado em um futuro próximo.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL et al.Estatísticas Globais de Câncer 2020: GLOBOCAN estima incidência e mortalidade de 36 tipos de câncer em 185 países.CA Câncer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Sede da Comissão Nacional de Saúde.Critérios para o diagnóstico e tratamento do câncer de fígado primário (edição de 2022) [J].Jornal de Doenças Hepáticas Clínicas, 2022, 38(2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z, et al.Diretrizes para o diagnóstico e tratamento do carcinoma hepatocelular (edição 2019).Câncer de fígado.2020;9(6):682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K, et al.Diretrizes de prática clínica para carcinoma hepatocelular: Sociedade Japonesa de Doenças do Fígado, 2017 (4ª Diretrizes do JSH-HCC), atualização de 2019.Reservatório de Doenças Hepáticas.2019;49(10):1109–1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA Biópsia líquida na doença hepática crônica.Ana Hepato.2021;20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.Biópsia de câncer de mama líquido: uma revisão focada.Arch Pathol Lab Med.2021;145(6):678–686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Vigilância para carcinoma hepatocelular: melhores práticas atuais e direções futuras.Gastroenterologia.2019;157(1):54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. Associação Europeia de Pesquisa L, Organização Europeia R, C Therapeutics.Diretrizes clínicas EASL-EORTC: tratamento do carcinoma hepatocelular.J Heparina.2012;56(4):908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK et al.Análise combinada de AFP e HCCR-1 como marcadores sorológicos úteis no carcinoma hepatocelular pequeno: um estudo de coorte prospectivo.Dis Mark.2012;32(4):265–271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S, et al.Expressão diferencial do microRNA-125b plasmático na doença hepática associada ao vírus da hepatite B e potencial diagnóstico do carcinoma hepatocelular induzido pelo vírus da hepatite B.Reservatório de doença hepática.2017;47(4):312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. et al.Biologia e significado da alfa-fetoproteína no carcinoma hepatocelular.Fígado int.2019;39(12):2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N, et al.Diretrizes clínicas para o tratamento do carcinoma hepatocelular na região da Ásia-Pacífico: atualização de 2017.Organização Internacional para Doenças Hepáticas.2017;11(4):317–370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei et al.Valor diagnóstico do soro PIVKA-II sozinho ou em combinação com AFP em pacientes chineses com carcinoma hepatocelular.Dis Mark.2021;2021:8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. et al.Câncer de pulmão de células não pequenas biópsia de fluido humoral não plasmático: mais perto do tumor!célula.2020;9(11).doi: 10.3390/cells9112486
15. Mader S, Pantel K. Biópsia líquida: situação atual e perspectivas futuras.Tratamento Oncol Res.2017;40(7-8):404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P, et al.Biópsia de câncer em meio líquido: uma ferramenta diagnóstica multimodal em oncologia clínica.O Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Nucleic acids in human plasma.CR Seances Soc Biol Fil.1948;142(3-4):241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, et al.Detecção avançada de DNA tumoral circulante por análise de tamanho de fragmento.A ciência traduz a medicina.2018;10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.Comprimento do fragmento de DNA do tumor circulante.genes PLOS.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. DNA tumoral circulante: um biomarcador promissor em biópsia de câncer à base de líquido.tumor alvo.2016;7(30):48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ et al.Detecção de DNA tumoral circulante em estágios iniciais e tardios de malignidades humanas.A ciência traduz a medicina.2014;6(224):224ra24.doi:10.1126/scitranslmmed.3007094
22. Mehes G. Biópsia líquida para análise preditiva mutacional de câncer sólido: perspectiva de um patologista.J Biotecnologia.2019;297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.Detecção precoce de tumores por triagem de DNA no plasma circulante: hype ou esperança?Direito clínico belga.2020;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. Efeito do vírus da hepatite e envelhecimento na metilação do DNA na hepatocarcinogênese humana.Histopatologia.2010;25(5):647–654.doi: 10.14670/HH-25.647